Analýza rastlín, biogeocenológia (manuál). Metódy štúdia rastlinných organizmov. Hodnota botanických vedomostí pre prípravu špecialistov v agrochémii a pôdoznalestve Chemické metódy výskumu rastlín
Už začiatkom 16. stor. zistila sa dôležitá pravda: liečivé vlastnosti každá rastlina je určená svojim chemickým zložením, teda prítomnosť v ňom určitých látok, ktoré majú určitý vplyv na ľudský organizmus. Na základe analýzy mnohých skutočností bolo možné identifikovať určité farmakologické vlastnosti a spektrum terapeutického pôsobenia mnohých skupín chemických zlúčenín tzv. aktívne zložky. Najvýznamnejšie z nich sú alkaloidy, srdcové glykozidy, triterpénové glykozidy (saponíny), flavonoidy (a iné fenolové zlúčeniny), kumaríny, chinóny, xangóny, seskviterpénové laktóny, lignany, aminokyseliny, polysacharidy a niektoré ďalšie zlúčeniny. Zo 70 skupín v súčasnosti známych prírodných zlúčenín nás často zaujíma len niekoľko skupín, ktoré majú biologickú aktivitu. To obmedzuje výber a urýchľuje tak hľadanie prírodných chemikálií, ktoré potrebujeme. Napríklad, antivírusová aktivita majú len niektoré skupiny flavonoidov, xantónov, alkaloidov, terpenoidov a alkoholov; protinádorové- niektoré alkaloidy, kyanidy, triterpénové ketóny, diterpenoidy, polysacharidy, fenolové zlúčeniny atď. Polyfenolové zlúčeniny sa vyznačujú hypotenzívnym, spazmolytickým, protivredovým, choleretickým a baktericídnym účinkom. Mnoho tried chemických zlúčenín a jednotlivých chemikálií má presne definované a skôr obmedzené spektrum biomedicínskej aktivity. Iné, spravidla veľmi široké triedy, ako napr alkaloidy, majú veľmi široké, pestré spektrum účinku. Takéto zlúčeniny si zaslúžia komplexnú lekársku a biologickú štúdiu a predovšetkým v oblastiach, ktoré nás zaujímajú, odporúčame. úspechov analytická chémia umožnilo vyvinúť jednoduché a rýchle metódy (expresné metódy) na identifikáciu chemických zlúčenín a jednotlivých chemikálií v triedach (skupinách), ktoré potrebujeme. V dôsledku toho metóda hromadných chemických analýz, inak nazývaná chemický skríning (od anglické slovo preosievanie - preosievanie, triedenie cez sito). Často sa praktizuje hľadanie požadovaných chemických zlúčenín analýzou všetkých rastlín v skúmanej oblasti.
Metóda chemického skríningu
Metóda chemického skríningu v kombinácii s údajmi o použití rastliny v empirickej medicíne a zohľadňujúca jej systematické postavenie poskytuje najefektívnejšie výsledky. Skúsenosti naznačujú, že takmer všetky rastliny používané v empirickej medicíne obsahujú triedy nám známych biologicky aktívnych zlúčenín. Preto hľadanie látok, ktoré potrebujeme, by sa malo v prvom rade cielene vykonávať medzi rastlinami, ktoré nejakým spôsobom objavili svoju farmakologickú alebo chemoterapeutickú aktivitu. Expresná metóda možno kombinovať s predbežným výberom perspektívnych druhov, odrôd a populácií v dôsledku ich organoleptického hodnotenia a analýzy etnobotanických údajov, ktoré nepriamo naznačujú prítomnosť látok, ktoré nás zaujímajú v rastline. Podobnú metódu výberu široko používal akademik N. I. Vavilov pri hodnotení kvality východiskového materiálu rôznych úžitkové rastliny podieľajú sa na výbere a genetickom výskume. V rokoch prvých päťročných plánov sa takto vo flóre ZSSR hľadali nové gumonosné závody.
Prvýkrát vo veľkom meradle chemická metóda skríningu pri hľadaní nového liečivé rastliny začal využívať vedúci stredoázijských expedícií Celoúniového vedecko-výskumného chemicko-farmaceutického ústavu (VNIHFI) P. S. Massagetov. Skúmanie viac ako 1400 druhov rastlín umožnilo akademikovi A.P. Orekhovovi a jeho študentom opísať okolo 100 nových alkaloidov do roku 19G0 a zorganizovať v ZSSR výrobu tých, ktoré sú potrebné na lekárske účely a kontrolu škodcov. Ústav chémie rastlinných látok Akadémie vied Uzbeckej SSR preskúmal asi 4000 rastlinných druhov, identifikoval 415 alkaloidov a prvýkrát stanovil štruktúru 206 z nich. Expedície VILR preskúmali 1498 druhov rastlín Kaukazu, 1026 druhov Ďalekého východu, mnoho rastlín Strednej Ázie, Sibíri a európskej časti ZSSR. Len na Ďalekom východe sa našlo 417 rastlín nesúcich alkaloidy, vrátane polokerov securinega, obsahujúcich nový alkaloid sekurinín – prostriedok účinku podobného strychnínu. Do konca roku 1967 bola celosvetovo opísaná a stanovená štruktúra 4349 alkaloidov. Ďalšou fázou hľadania je hĺbkové komplexné posúdenie farmakologickej, chemoterapeutickej a protinádorovej aktivity izolované jednotlivé látky alebo celkové prípravky, ktoré ich obsahujú. Treba poznamenať, že v krajine ako celku a globálne chemický výskum sú ďaleko pred možnosťami hĺbkového lekárskeho a biologického testovania nových chemických zlúčenín nachádzajúcich sa v rastlinách. V súčasnosti je stanovená štruktúra 12 000 jednotlivých zlúčenín izolovaných z rastlín, žiaľ, mnohé z nich ešte neboli podrobené medicínskemu a biologickému štúdiu. Zo všetkých tried chemické zlúčeniny najvyššia hodnota určite majú alkaloidy; 100 z nich sa odporúča ako dôležité lieky, napríklad atropín, berberín, kodeín, kokaín, kofeín, morfín, papaverín, pilokarpín, platifillin, rezerpín, salsolín, sekurín, strychnín, chinín, cytizín, efedrín atď. Väčšina týchto liekov sa získajú ako výsledok vyhľadávania na základe chemického skríningu. Alarmujúci je však jednostranný rozvoj tejto metódy, ktorá sa v mnohých ústavoch a laboratóriách zredukovala len na hľadanie iba alkaloidných rastlín.Netreba zabúdať, že okrem alkaloidov vznikajú aj nové biologicky aktívne rastlinné látky patriace na iné triedy chemických zlúčenín sa identifikujú každoročne. Ak pred rokom 1956 bola známa štruktúra iba 2669 prírodných zlúčenín z rastlín, ktoré nesúviseli s alkaloidmi, tak o ďalších 5 rokov (1957-1961) sa v rastlinách našlo ďalších 1754 jednotlivých organických látok. Teraz počet chemických látok s ustálenou štruktúrou dosahuje 7 000, čo spolu s alkaloidmi tvorí vyše 12 000 rastlinných látok. Chemický skríning pomaly vychádza z „alkaloidového obdobia“. Zo 70 v súčasnosti známych skupín a tried rastlinných látok (Karrer et. al., 1977) sa vykonáva iba v 10 triedach zlúčenín, pretože neexistujú spoľahlivé a rýchle expresné metódy na stanovenie prítomnosti iných zlúčenín v rastlinách. materiálov. Zapojenie do chemického skríningu nových tried biologicky aktívnych zlúčenín je dôležitou rezervou na zvýšenie tempa a účinnosti hľadania nových liečiv z rastlín. Je veľmi dôležité vyvinúť metódy na rýchle vyhľadávanie jednotlivých chemikálií, napríklad berberínu, rutínu, kyseliny askorbovej, morfínu, cytizínu atď. nových terapeutických liekov. Mnohé z nich majú široké spektrum biologickej aktivity. Napríklad alkaloidy sú schválené na použitie v lekárskej praxi ako analeptiká, analgetiká, sedatíva, hypotenzíva, expektorans, choleretikum, antispazmodikum, maternicové, tonizujúce centrálne nervový systém a drogám podobným adrenalínu. Flavonoidy sú schopné spevniť steny kapilár, znížiť tonus hladkého svalstva čreva, stimulovať sekréciu žlče, zvýšiť neutralizačnú funkciu pečene, niektoré z nich majú spazmolytické, kardiotonické a protinádorové účinky. Mnohé polyfenolové zlúčeniny sa používajú ako hypotenzívne, antispazmodické, protivredové, choleretické a antibakteriálne činidlá. Protinádorová aktivita bola zaznamenaná u kyanidov (napríklad obsiahnutých v semenách broskýň atď.), triterpénketónov, diterpenoidov, polysacharidov, alkaloidov, fenolov a iných zlúčenín. Stále viac liekov sa vytvára zo srdcových glykozidov, aminokyselín, alkoholov, kumarínov. polysacharidy, aldehydy, seskviterpénové laktóny, steroidné zlúčeniny. Často lekárska aplikácia nachádzajú dávno známe chemické látky, v ktorých sa len nedávno podarilo odhaliť tú či onú medicínsku a biologickú aktivitu a vyvinúť racionálny spôsob výroby liekov. Chemický skríning umožňuje nielen identifikovať nové sľubné objekty na štúdium, ale aj: - identifikovať korelácie medzi systematickou polohou rastliny, jej chemickým zložením a biomedicínskou aktivitou;
- zistiť geografické a environmentálne faktory, ktoré podporujú alebo bránia hromadeniu určitých účinných látok v rastlinách;
- určiť význam biologicky aktívnych látok pre rastliny, ktoré ich produkujú;
- identifikovať chemické rasy v rastlinách, ktoré sa od seba dedične líšia v prítomnosti určitých účinných látok.
Štúdium rastlinných orgánov
Rôzne orgány rastliny sa často líšia nielen kvantitatívnym obsahom účinných látok, ale aj ich kvalitatívne zloženie. Napríklad alkaloid sinomenín sa nachádza iba v bylinke mesačného semena daurského a cytizín sa nachádza iba v plodoch termopsie kopijovitej, pričom v jej prízemných častiach chýba až do konca kvitnutia, zatiaľ čo v termopse striedavej -kvetový cytizín sa nachádza vo veľkých množstvách v nadzemných častiach vo všetkých fázach vývoja rastlín. Preto, aby sme získali úplný obraz o chemickom zložení každej rastliny, je potrebné analyzovať aspoň štyri jej orgány: podzemok (korene, rizómy, cibule, hľuzy), listy a stonky (v bylinkách listy sú vždy bohatšie na účinné látky ako stonky, kvety (alebo súkvetia). ), plody a semená. U drevín a kríkov sa účinné látky často hromadia v kôre stoniek (a koreňov), niekedy len v semenáčikoch, niektorých častiach kvetu, plodov a semien.
Chemické zloženie každého rastlinného orgánu sa tiež výrazne líši v rôznych fázach jeho vývoja. Maximálny obsah niektorých látok sa pozoruje v fáza pučania, iní - v fáza plného kvitnutia, tretí - počas plodenie Napríklad alkaloid triakantín sa nachádza vo významnom množstve len v rozkvitnutých listoch kobylky trojostnej, zatiaľ čo v ostatných fázach vývoja prakticky chýba vo všetkých orgánoch tejto rastliny. Je teda ľahké vypočítať, že na identifikáciu napr. iba úplný zoznam alkaloidných rastlín flóry ZSSR v počte asi 20 000 druhov je potrebné urobiť minimálne 160 000 rozborov (20 000 druhov X 4 orgány X 2 fázy vývoja), čo si vyžiada cca 8000 dní práce 1 laboratória. asistent-analytik. Približne rovnaké množstvo času sa musí venovať zisteniu prítomnosti alebo neprítomnosti flavonoidov, kumarínov, srdcových glykozidov, tanínov, polysacharidov, triterpénových glykozidov a každej inej triedy chemických zlúčenín vo všetkých rastlinách flóry ZSSR, ak sa vykonávajú analýzy. vykonávané bez predbežného utratenia rastlín z jedného alebo druhého dôvodu. Okrem toho rovnaké orgány v rovnakej fáze vývoja rastlín v jednom regióne môžu mať potrebné účinné látky, zatiaľ čo v inom regióne ich mať nemusia. Okrem geografických a environmentálnych faktorov (vplyv teploty, vlhkosti, slnečného žiarenia atď.) to môže ovplyvniť prítomnosť špeciálnych chemických rás v danej rastline, ktoré sú úplne nerozoznateľné podľa morfologických znakov. To všetko značne komplikuje úlohu a zdá sa, že vyhliadky na dokončenie predbežného chemického hodnotenia flóry ZSSR a ešte viac celej zemegule sú veľmi vzdialené. Znalosť určitých vzorov však môže túto prácu výrazne zjednodušiť. Po prvé, nie je potrebné skúmať všetky orgány vo všetkých fázach vývoja. Každý orgán stačí rozobrať v optimálnej fáze, kedy obsahuje najväčší počet skúmanú látku. Predchádzajúce štúdie napríklad ukázali, že listy a stonky sú najbohatšie na alkaloidy vo fáze pučania, kôru - počas jarného toku miazgy a kvety - vo fáze ich plného kvitnutia. Plody a semená však môžu v zrelom a nezrelom stave obsahovať rôzne alkaloidy a v rôznych množstvách, a preto ich, ak je to možné, treba vyšetrovať dvakrát. Znalosť týchto vzorcov značne zjednodušuje predbežné chemické hodnotenie rastlín. Kompletné vyšetrenie všetkých typov- metóda je účinná, ale stále je to slepá práca! Je možné bez vykonania čo i len najjednoduchšej chemickej analýzy rozlíšiť skupiny rastlín, ktoré pravdepodobne obsahujú jednu alebo druhú triedu chemických zlúčenín, od tých, ktoré tieto látky zjavne neobsahujú? Inými slovami, je možné určiť chemické zloženie rastlín okom? Ako bude uvedené v ďalšej časti našej brožúry, vo všeobecnosti môžeme na túto otázku odpovedať kladne. FEDERÁLNA AGENTÚRA PRE VZDELÁVANIE
ŠTÁTNA UNIVERZITA VORONEŽ
INFORMAČNÁ A ANALYTICKÁ PODPORA ENVIRONMENTÁLNYCH AKTIVIT V POĽNOHOSPODÁRSTVO
Vzdelávacia a metodická príručka pre vysoké školy
Zostavil: L.I. Brekhova L.D. Stakhurlova D.I. Shcheglov A.I. Gromovik
VORONEŽ - 2009
Schválené Vedeckou a metodickou radou Fakulty biológie a pôdy - Protokol č.10 zo dňa 4.6.2009
Recenzent doktor biologických vied, profesor L.A. Yablonsky
Učebnú pomôcku pripravili na Katedre pôdoznalectva a pôdohospodárstva Fakulty biológie a pôdy Voronežskej štátnej univerzity.
Pre špecializáciu: 020701 - Pedistika
Nedostatok alebo nadbytok akéhokoľvek chemického prvku spôsobuje narušenie normálneho priebehu biochemických a fyziologických procesov v rastlinách, čo v konečnom dôsledku mení výnos a kvalitu plodín. Stanovenie chemického zloženia rastlín a ukazovateľov kvality produktov preto umožňuje identifikovať nepriaznivé podmienky prostredia pre rast kultúrnej aj prirodzenej vegetácie. V tomto ohľade je chemická analýza rastlinného materiálu neoddeliteľnou súčasťou aktivít ochrany životného prostredia.
Praktická príručka o informačnej a analytickej podpore environmentálnych aktivít v poľnohospodárstvo zostavené v súlade s programom laboratórnych hodín „Biogeocenológia“, „Rozbory rastlín“ a „Ochrana životného prostredia v poľnohospodárstve“ pre študentov 4. a 5. ročníka pôdneho odboru biologickej a pôdnej fakulty VŠU.
METÓDA ODBERU VZORIEK RASTLÍN A ICH PRÍPRAVY NA ANALÝZU
Odber vzoriek rastlín je veľmi dôležitým momentom efektívnosti diagnostiky výživy rastlín a hodnotenia dostupnosti pôdnych zdrojov pre ne.
Celá oblasť študovanej plodiny je vizuálne rozdelená do niekoľkých sekcií v závislosti od jej veľkosti a stavu rastlín. Ak sú v plodine oblasti s jasne najhoršie rastliny, následne sa tieto plochy vyznačia na terénnej mape, zisťuje sa, či zlý stav rastlín je dôsledkom ento alebo fytochoroby, lokálneho zhoršenia vlastností pôdy alebo iných rastových podmienok. Ak všetky tieto faktory nevysvetľujú dôvody zlého stavu rastlín, potom možno predpokladať, že je narušená ich výživa. To je overené metódami diagnostiky rastlín. Vezmite si pro-
z lokalít s najhoršími a najlepšími rastlinami a pôdou pod nimi a ich rozbormi zisťujú príčiny zhoršenia stavu rastlín a ich úroveň výživy.
Ak výsev nie je jednotný z hľadiska stavu rastlín, tak pri odbere vzoriek treba zabezpečiť, aby vzorky zodpovedali priemernému stavu rastlín na danom úseku poľa. Rastliny s koreňmi sa odoberú z každého vybraného poľa pozdĺž dvoch uhlopriečok. Používajú sa: a) na zohľadnenie prírastku hmotnosti a priebehu tvorby orgánov - budúcej štruktúry úrody a b) na chemická diagnostika.
V skorých fázach (s dvomi alebo tromi listami) by vzorka mala obsahovať aspoň 100 rastlín na 1 ha. Neskôr na obilniny, ľan, pohánku, hrach a iné - minimálne 25 - 30 rastlín na 1 ha. Vo veľkých rastlinách (dospelá kukurica, kapusta atď.) sa spodné zdravé listy odoberajú najmenej z 50 rastlín. Aby sa zohľadnila akumulácia po fázach a odstránenie plodinou, do analýzy sa berie celá nadzemná časť rastliny.
O dreviny - ovocné, bobuľovité, hroznové, okrasné a lesné - vzhľadom na zvláštnosti ich zmien súvisiacich s vekom, frekvencia plodenia atď. je odber vzoriek o niečo komplikovanejší ako pri poľných plodinách. Sú nasledujúce vekových skupín: sadenice, diviaky, vrúbľované dvojročné, sadenice, mladé a plodné (začínajúce rodiť, v plnej a doznievajúce rodiace) stromy. U sadeníc je v prvom mesiaci rastu zahrnutá do vzorky celá rastlina, po ktorej nasleduje jej rozdelenie na orgány: listy, stonky a korene. V druhom a nasledujúcich mesiacoch sa vyberú úplne vytvorené listy, zvyčajne prvé dva po najmladšom, počítajúc od vrchu. Prvé dva vytvorené listy sa tiež odoberajú od dvojročných voľne žijúcich vtákov, počítajúc od vrcholu rastového výhonku. U štepených dvojročných a semenáčikov, ako aj u dospelých jedincov, odoberajú stredné listy rastových výhonkov.
O bobule - egreše, ríbezle a iné - vyberáme z výhonkov aktuálneho porastu 3 - 4 listov z 20 kríkov tak, aby vo vzorke
bolo tam najmenej 60 - 80 listov. Dospelé listy sa odoberajú z jahôd v rovnakom množstve.
Všeobecnou požiadavkou je zjednotenie techník odberu vzoriek, spracovania a skladovania: odber striktne rovnakých častí zo všetkých rastlín podľa ich vrstvenia, veku, umiestnenia na rastline, neprítomnosti chorôb atď. Dôležité je aj to, či boli listy na priamom slnku alebo v tieni a vo všetkých prípadoch treba vyberať listy s rovnakým umiestnením vzhľadom na slnečné svetlo, najlepšie na svetle.
Pri analýze koreňového systému sa priemerná laboratórna vzorka pred vážením starostlivo premyje vodou. voda z vodovodu opláchnuté v destilovanej vode a vysušené filtračným papierom.
Laboratórna vzorka obilia alebo semien sa odoberie z mnohých miest (vrecko, krabica, stroj) sondou, potom sa v rovnomernej vrstve rozloží na papier vo forme obdĺžnika, rozdelí sa na štyri časti a z dvoch sa odoberie materiál. protiľahlé časti na požadované množstvo na analýzu.
Jeden z dôležité body pri príprave rastlinného materiálu na analýzu je jeho správna fixácia, ak sa analýzy nemajú vykonávať v čerstvom materiáli.
Pre chemické posúdenie rastlinného materiálu podľa celkového obsahu živín (N, P, K, Ca, Mg, Fe atď.) sa vzorky rastlín sušia do suchého stavu na vzduchu v sušiarni pri
teplota 50 - 60 ° alebo na vzduchu.
Pri analýzach, ktorých výsledky vyvodia závery o stave živých rastlín, by sa mal použiť čerstvý materiál, pretože vädnutie spôsobuje výraznú zmenu v zložení látky alebo zníženie jej množstva a dokonca aj vymiznutie obsiahnutých látok. v
živé rastliny. Napríklad celulóza nie je ovplyvnená degradáciou, zatiaľ čo škrob, bielkoviny, organické kyseliny a najmä vitamíny sa rozkladajú po niekoľkých hodinách vädnutia. To núti experimentátora vykonávať analýzy na čerstvom materiáli pri veľmi vysokej rýchlosti krátka dobačo nie je vždy možné. Preto sa často využíva fixácia rastlinného materiálu, ktorej účelom je stabilizácia nestabilných rastlinných látok. Rozhodujúci význam má inaktivácia enzýmov. V závislosti od cieľov experimentu sa používajú rôzne spôsoby fixácie rastlín.
Upevnenie trajektu. Tento typ fixácie rastlinného materiálu sa používa vtedy, keď nie je potrebné určovať vo vode rozpustné zlúčeniny (bunková šťava, sacharidy, draslík atď.). Počas spracovania surového rastlinného materiálu môže autolýza prebiehať tak silno, že zloženie konečného produktu sa niekedy výrazne líši od zloženia východiskového materiálu.
V praxi sa fixácia parou uskutočňuje nasledovne: vo vodnom kúpeli je zavesená kovová sieť, kúpeľ je zhora pokrytý hustým nehorľavým materiálom a voda sa zahrieva na rýchle uvoľnenie pary. Potom sa na pletivo vo vnútri kúpeľa umiestni čerstvý rastlinný materiál. Doba fixácie 15 - 20 min. Potom rastliny vysušte
vatsya v termostate pri teplote 60 °.
Fixácia teploty. Rastlinný materiál je umiestnený v kraft papierových vreciach a šťavnaté ovocie a drvená zelenina sa voľne ukladá do smaltovaných alebo hliníkových kyviet. Materiál sa udržiava 10 - 20 minút pri teplote 90 - 95 °. Toto deaktivuje väčšina enzýmy. Potom sa hmota listovej stonky, ktorá stratila turgor, a plody sa sušia v sušiarni pri teplote 60 ° s vetraním alebo bez neho.
Pri použití tohto spôsobu fixácie rastlín je potrebné mať na pamäti, že predĺžené sušenie rastlinného materiálu v tme
teploty 80° a vyššie vedú k stratám a zmenám látok v dôsledku chemických premien (tepelný rozklad určitých látok, karamelizácia sacharidov a pod.), ako aj v dôsledku prchavosti amónnych solí a niektorých organických zlúčenín. Okrem toho teplota surového rastlinného materiálu nemôže dosiahnuť teplotu životné prostredie(sušiareň), kým sa voda neodparí a kým sa všetok vstup tepla už nepremení na latentné teplo vyparovania.
Za prijateľný a prijateľný spôsob fixácie sa v niektorých prípadoch považuje aj rýchle a šetrné vysušenie vzorky rastliny. Pri šikovnom vedení tohto procesu môžu byť odchýlky v zložení sušiny malé. To má za následok denaturáciu proteínov a inaktiváciu enzýmov. Typicky sa sušenie uskutočňuje v sušiarne(termostaty) alebo špeciálne sušiace komory. Materiál schne oveľa rýchlejšie a spoľahlivejšie, ak cez skriňu (komoru) cirkuluje ohriaty vzduch. Najvhodnejšia teplota na sušenie
šitie od 50 do 60°.
Sušený materiál sa lepšie uchováva v tme a chlade. Keďže mnohé látky obsiahnuté v rastlinách sú schopné samooxidácie aj v suchom stave, odporúča sa usušený materiál skladovať v tesne uzavretých nádobách (banky so zabrúsenými zátkami, exsikátory a pod.), naplnených po vrch materiálom tak, aby v nádobách nezostáva veľa vzduchu.
Mrazivý materiál. Rastlinný materiál je veľmi dobre zachovaný pri teplotách od -20 do -30 ° za predpokladu, že zmrazenie nastane dostatočne rýchlo (nie viac ako 1 hodinu). Výhoda skladovania rastlinného materiálu v zmrazenom stave je spôsobená jednak vplyvom chladenia, jednak dehydratáciou materiálu v dôsledku prechodu vody do pevného skupenstva. Treba mať na pamäti, že pri mrazení
enzýmy sa inaktivujú len dočasne a po rozmrazení môžu v rastlinnom materiáli nastať enzymatické premeny.
Ošetrenie rastlín organickými rozpúšťadlami. Ako kvalita
Ako fixačné prostriedky možno použiť vriaci lieh, acetón, éter a pod.. Fixácia rastlinného materiálu týmto spôsobom sa vykonáva ponorením do vhodného rozpúšťadla. Pri tejto metóde však dochádza nielen k fixácii rastlinného materiálu, ale aj k extrakcii množstva látok. Preto sa takáto fixácia môže použiť len vtedy, ak je vopred známe, že látky, ktoré sa majú stanoviť, nie sú extrahované týmto rozpúšťadlom.
Vzorky rastlín vysušené po fixácii sa rozdrvia nožnicami a potom v mlyne. Rozdrvený materiál sa preoseje cez sito s priemerom otvoru 1 mm. Zároveň sa zo vzorky nič nevyhodí, keďže odstránením časti materiálu, ktorý neprešiel sitom z prvého preosievania, tým meníme kvalitu priemernej vzorky. Veľké častice opäť prechádzajú cez mlyn a sito. Zvyšky na site by sa mali rozdrviť v mažiari.
Z takto pripravenej laboratórnej priemernej vzorky sa odoberie analytická vzorka. Na tento účel sa rastlinný materiál, rozložený v tenkej rovnomernej vrstve na liste lesklého papiera, diagonálne rozdelí na štyri časti. Potom sa odstránia dva protiľahlé trojuholníky a zvyšná hmota sa opäť rozdelí v tenkej vrstve na celý list papiera. Opäť sa nakreslia diagonály a opäť sa odstránia dva protiľahlé trojuholníky. Toto sa robí dovtedy, kým množstvo látky, ktoré je potrebné pre analytickú vzorku, nezostane na hárku. Vybraná analytická vzorka sa prenesie do sklenená nádoba s lapovanou zátkou. V tomto stave môže byť uložený na neurčito. Hmotnosť analytickej vzorky závisí od množstva a metodológie výskumu a pohybuje sa od 50 do niekoľkých stoviek gramov rastlinného materiálu.
Všetky analýzy rastlinného materiálu by sa mali vykonávať s dvoma paralelne odobratými vzorkami. Iba podobné výsledky môžu potvrdiť správnosť vykonanej práce.
S rastlinami by sa malo manipulovať v suchom a čistom laboratóriu bez výparov amoniaku, prchavých kyselín a iných zlúčenín, ktoré by mohli ovplyvniť kvalitu vzorky.
Výsledky analýz možno vypočítať pre vzorky látky suché aj pre absolútne suché. V suchom stave je množstvo vody v materiáli v rovnováhe s vodnou parou vo vzduchu. Táto voda sa nazýva hygroskopická a jej množstvo závisí od rastliny aj od stavu vzduchu: čím je vzduch vlhkejší, tým je voda v rastlinnom materiáli hygroskopickejšia. Na prevod údajov na sušinu je potrebné určiť množstvo hygroskopickej vlhkosti vo vzorke.
STANOVENIE SUŠINY A HYGROSKOPICKEJ VLHKOSTI VO VZDUCHU SUCHOM MATERIÁLU
Pri chemickej analýze sa kvantitatívny obsah konkrétnej zložky vypočítava na základe sušiny. Preto sa pred analýzou stanoví množstvo vlhkosti v materiáli a tým sa určí množstvo absolútne sušiny v ňom.
Priebeh analýzy. Analytická vzorka látky sa rozotrie v tenkej vrstve na list lesklého papiera. Potom špachtľou rôzne miesta malé štipky hmoty rozložené na plechu sa odoberú do sklenenej fľaše predsušenej na konštantnú hmotnosť. Vzorka by mala mať hmotnosť približne 5 g. Navažovačka spolu so vzorkou sa odváži na analytických váhach a umiestni sa do termostatu, ktorého teplota vo vnútri sa udržiava na 100-1050 °C. Prvýkrát v termostate sa otvorená fľaša so vzorkou uchováva 4-6 hodín. Po tomto čase sa fľaša z termostatu premiestni do exsikátora na ochladenie, po 20-30 hod.
minút sa fľaša odváži. Potom sa fľaša otvorí a opäť umiestni do termostatu (pri rovnakej teplote) na 2 hodiny. Sušenie, chladenie a váženie sa opakuje, kým vážená fľaša nedosiahne konštantnú hmotnosť (rozdiel medzi poslednými dvoma váženiami musí byť menší ako 0,0003 g).
Percento vody sa vypočíta podľa vzorca:
kde: x je percento vody; c – hmotnosť rastlinného materiálu pred sušením, g; c1 - hmotnosť rastlinného materiálu po vysušení.
Vybavenie a náčinie:
1) termostat;
2) sklenené fľaše.
Formulár na zápis výsledkov
Hmotnosť krabice s |
Hmotnosť krabice s |
||||||||
zavesený na |
|||||||||
až do |
až do |
Záves |
|||||||
po vysušení - |
|||||||||
sušenie- |
sušenie- |
po vysu- |
|||||||
šitie, g |
|||||||||
STANOVENIE "SUROVÉHO" POPOLA METÓDOU SUCHÉHO SPORENIA
Popol je zvyšok získaný po spaľovaní a kalcinácii organických látok. Pri spaľovaní uniká uhlík, vodík, dusík a čiastočne kyslík a zostávajú len neprchavé oxidy.
Obsah a zloženie popolavých prvkov rastlín závisí od druhu, rastu a vývoja rastlín a najmä od pôdno-klimatických a agrotechnických podmienok ich pestovania. Koncentrácia prvkov popola sa výrazne líši v rôznych tkanivách a orgánoch rastlín. Obsah popola v listoch a bylinných orgánoch rastlín je teda oveľa vyšší ako v semenách. V listoch je viac popola ako v stonkách,
Pri určovaní potreby rastlín v hnojivách spolu s agrochemické analýzy pôdne, poľné a vegetačné pokusy, mikrobiologické a iné metódy sa začali využívať čoraz viac metódy diagnostiky rastlín.
V súčasnosti sa široko používajú tieto metódy diagnostiky rastlín: 1) chemický rozbor rastlín, 2) vizuálna diagnostika a 3) vstrekovanie a postrek. Chemická analýza rastlín je najbežnejšou metódou diagnostiky potreby aplikácie hnojív.
Chemická diagnostika je zastúpená tromi typmi: 1) listová diagnostika, 2) tkanivová diagnostika a 3) rýchle (expresné) metódy analýzy rastlín.
Dôležité kroky v diagnostike rastlín pomocou chemickej analýzy sú: 1) odber vzorky rastliny na analýzu; 2) berúc do úvahy sprievodné podmienky rastu rastlín; 3) chemická analýza rastlín; 4) spracovanie analytických údajov a vypracovanie záveru o potrebe rastlín v hnojivách.
Odber vzoriek rastlín na analýzu. Pri výbere rastlín na analýzu treba dbať na to, aby odobraté rastliny zodpovedali priemernému stavu rastlín v danej časti poľa. Ak je výsev homogénny, potom môže byť obmedzená jedna vzorka; ak existujú škvrny lepšie vyvinutých alebo naopak horšie vyvinutých rastlín, potom sa z každej z týchto škvŕn odoberie samostatná vzorka na určenie príčiny zmeneného stavu rastliny. Obsah živiny v dobre vyvinutých rastlinách možno v tomto prípade použiť ako indikátor normálneho zloženia daného rastlinného druhu.
Pri vykonávaní analýz je potrebné zjednotiť techniku odberu a prípravy vzorky: odber rovnakých častí rastliny vrstvením, polohu na rastline a fyziologický vek.
Výber časti rastliny na analýzu závisí od metódy chemickej diagnostiky. Na získanie spoľahlivých údajov je potrebné odobrať vzorky aspoň z desiatich rastlín.
Pri stromových plodinách je kvôli zvláštnostiam ich zmien súvisiacich s vekom odber vzoriek rastlín o niečo zložitejší ako pri poľných plodinách. Odporúča sa vykonať výskum v nasledujúcom vekové obdobia: sadenice, sadenice, mladé a plodnice. Listy, ich stopky, púčiky, výhonky alebo iné orgány by sa mali odoberať z hornej tretiny výhonkov zo stredného pásma koruny stromov alebo kríkov rovnakého veku a kvality, pri dodržaní rovnakého poradia, a to: buď len od ovocné výhonky, alebo len z neovocných výhonkov, prípadne z výhonkov aktuálneho porastu, prípadne listov na priamom slnku alebo rozptýlenom svetle. Všetky tieto body je potrebné vziať do úvahy, pretože všetky ovplyvňujú chemické zloženie listov. Je potrebné poznamenať, že najlepšia korelácia medzi chemickým zložením listu a úrodou plodov sa dosiahne, ak sa ako vzorka odoberie list, v ktorého pazuche sa vyvinie kvetný puk.
V akej fáze vývoja rastliny by sa mali odoberať vzorky na analýzu? Ak máme na zreteli získanie najlepšej korelácie s úrodou, potom sa najlepšie ukáže analýza rastlín vo fáze kvitnutia alebo dozrievania. Lundegard, Kolarzhik a ďalší výskumníci sa teda domnievajú, že kvitnutie je takouto fázou pre všetky rastliny, pretože v tomto okamihu sú hlavné rastové procesy ukončené a prírastok hmoty „nerozriedi“ percento látok.
Vyriešiť problém, ako zmeniť výživu rastlín, aby sa zabezpečila tvorba najlepšia úroda, je potrebné analyzovať rastliny v skorších obdobiach vývoja a nie raz, ale niekoľkokrát (tri alebo štyri), počnúc objavením sa jedného alebo dvoch listov.
Čas odberu vzoriek. I termín: pre jarné obilniny (pšenica, ovos, kukurica) - vo fáze troch listov, t.j. pred začiatkom diferenciácie zárodočného klasu alebo metliny; pre ľan - začiatok "vianočného stromčeka"; pre zemiaky, strukoviny, bavlnu a iné - fáza štyroch až piatich pravých listov, t.j. pred pučaním; pre cukrovú repu - fáza troch pravých listov.
II termín: pre jarné obilniny - vo fáze piatich listov, t.j. vo fáze potrubia; pre repu - vo fáze nasadenia šiesteho listu; pre všetkých ostatných - počas vytvárania prvých malých zelených púčikov, t.j. až do samého začiatku pučania.
III termín: vo fáze kvitnutia; pre repu - pri nasadení ôsmeho-deviateho listu.
IV termín: vo fáze mliečnej zrelosti semien; pre repu - týždeň pred zberom.
Pri drevinách a bobuliach sa vzorky odoberajú podľa týchto fáz tvorby úrody: a) pred kvitnutím, t. j. na začiatku silného rastu, b) kvitnutím, t. j. v období silného rastu a fyziologického vypadávania vaječníkov, c) tvorba plodov, d) dozrievanie a zber a e) obdobie jesenného opadu lístia.
Pri stanovovaní načasovania odberu vzoriek rastlín je tiež potrebné vziať do úvahy, v ktorom období rastu a vývoja sa vyskytujú kritické nutričné hladiny. Pojem "kritické úrovne" znamená najnižšie koncentrácie živín v rastlinách počas kritického obdobia ich vývoja, t.j. koncentrácie, pod ktorými sa rastlina zhoršuje a úroda klesá. Optimálnym zložením rastliny sa rozumie taký obsah živín v nej v kritických fázach jej vývoja, ktorý zabezpečuje vysokú úrodu.
Hodnoty kritických úrovní a optimálne zloženie sú uvedené pre niektoré kultúry nižšie. Vzorky sa odoberajú vo všetkých prípadoch v rovnakých hodinách dňa, najlepšie ráno (o 8-9 hodine), aby sa predišlo zmenám v zložení rastlín v dôsledku dennej stravy.
Účtovanie súvisiacich stavov. Nie vždy je správne posudzovať dostatočnosť či nedostatočnosť výživy rastlín niektorými prvkami len podľa chemického rozboru. Je známych veľa faktov, kedy nedostatok jednej alebo viacerých živín, oneskorenie vo fotosyntéze alebo narušenie vodného, tepelného a iného životne dôležitého režimu môže spôsobiť nahromadenie toho či onoho prvku v rastline, čo by v žiadnom prípade nemalo charakterizovať dostatok tento prvok v živnom médiu (pôda). Aby sa predišlo prípadným chybám a nepresnostiam v záveroch, je potrebné porovnať údaje chemického rozboru rastlín s množstvom ďalších ukazovateľov: s hmotnosťou, rastom a rýchlosťou vývoja rastlín v čase odberu vzoriek a s konečným zber, s vizuálnymi diagnostickými znakmi, so znakmi agrotechniky, s agrochemickými vlastnosťami pôdy, s poveternostnými podmienkami a množstvom ďalších ukazovateľov, ktoré ovplyvňujú výživu rastlín. Preto je jednou z najdôležitejších podmienok úspešného využitia diagnostiky rastlín čo najpodrobnejšie spísanie všetkých týchto ukazovateľov pre ich následné porovnanie medzi sebou a s údajmi z analýzy.
Chemický rozbor rastlín pre posledné roky získala uznanie a široké využitie v mnohých krajinách sveta ako metóda na štúdium výživy rastlín v teréne a ako metóda na stanovenie potreby rastlín v hnojivách. Výhodou tejto metódy je presne definovaný vzťah medzi ukazovateľmi analýzy rastlín a účinnosťou príslušných hnojív. Na analýzu sa neberie celá rastlina, ale nejaká konkrétna časť, častejšie list alebo listová stopka. Táto metóda sa nazýva diagnostika listov.[ ...]
Chemická analýza rastlín sa vykonáva s cieľom určiť množstvo živín, ktoré do nich vstúpili, čo sa môže použiť na posúdenie potreby hnojív (metódy Neubauera, Magnitského atď.), Na stanovenie ukazovateľov hodnoty potravín a krmív. produktov (stanovenie škrobu, cukru, bielkovín, vitamínov atď.) n) a riešiť rôzne otázky výživy a metabolizmu rastlín.[ ...]
Rastliny boli v tomto experimente kŕmené značeným dusíkom 24 dní po vyklíčení. Ako vrchný obväz sa použil síran amónny s trojnásobným obohatením izotopom N15 v dávke 0,24 g N na nádobu. Pretože značený síran amónny aplikovaný ako vrchná vrstva sa zriedil v pôde bežným síranom amónnym aplikovaným pred siatím a rastliny ho úplne nevyužili, skutočné obohatenie síranom amónnym v substráte bolo o niečo nižšie, asi 2,5. Z tabuľky 1, ktorá obsahuje údaje o výnosoch a výsledky chemickej analýzy rastlín vyplýva, že keď boli rastliny vystavené značenému dusíku od 6 do 72 hodín, hmotnosť rastlín zostala prakticky na rovnakej úrovni a iba 120 hodín po zavedením suplementácie dusíkom sa výrazne zvýšil.[ ...]
Chemická taxonómia doteraz nedokázala rozdeliť rastliny do veľkých taxonomických skupín na základe akejkoľvek chemickej zlúčeniny alebo skupiny zlúčenín. Chemická taxonómia pochádza z chemickej analýzy rastlín. Doteraz bola hlavná pozornosť venovaná európskym rastlinám a rastlinám mierneho pásma, pričom systematické štúdium tropických rastlín bolo nedostatočné. V poslednom desaťročí však naberá na význame najmä biochemická systematika, a to z dvoch dôvodov. Jednou z nich je pohodlnosť použitia rýchlych, jednoduchých a dobre reprodukovateľných chemicko-analytických metód na štúdium zloženia rastlín (medzi tieto metódy patrí napr. chromatografia a elektroforéza), druhou jednoduchosť identifikácie organických zlúčenín v rastlinách; oba tieto faktory prispeli k riešeniu taxonomických problémov.[ ...]
Pri diskusii o výsledkoch chemickej analýzy rastlín sme poukázali na to, že tieto údaje nemožno použiť na stanovenie žiadnych zákonitostí v zmene obsahu zásobných bielkovín v rastlinách v rôznych časoch ich zberu. Výsledky izotopovej analýzy naopak poukazujú na silnú obnovu dusíka týchto (proteínov) 48 a 96 hodín po zavedení vrchného obväzu značeným dusíkom, čo nás núti uznať, že v skutočnosti zásobné bielkoviny, ako aj konštitučné A ak sa v prvom období po zbere nezmenilo zloženie izotopov dusíka v zásobných proteínoch, potom to nie je základom pre záver, že je známe, že sú stabilné počas týchto období Experiment.[ ...]
Simultánne chemické analýzy rastlín ukázali, že celkové množstvo proteínového dusíka v tomto, ako aj iných podobných experimentoch počas tak krátkych časových úsekov sa prakticky vôbec nezmenilo alebo sa zmenilo len o relatívne malé množstvo (v rozmedzí 5-10 %). To naznačuje, že v rastlinách popri tvorbe nového množstva bielkovín dochádza k neustálej obnove už v rastline obsiahnutej bielkoviny. Proteínové molekuly v rastlinách majú teda relatívne krátku životnosť. Neustále sa ničia a znovu vytvárajú v procese intenzívneho metabolizmu rastlín.[ ...]
Tieto metódy diagnostiky výživy pomocou chemického rozboru rastlín sú založené na stanovení hrubého obsahu hlavných živín v listoch. Vybrané vzorky rastlín sa sušia a melú. Potom sa v laboratórnych podmienkach spopolní vzorka rastlinného materiálu a následne sa stanoví celkový obsah N, P205, KrO> CaO, MgO a ďalších živín. V paralelnej vzorke sa určuje množstvo vlhkosti.[ ...]
V tabuľke 10 sú uvedené údaje o výnosoch a údaje chemickej analýzy rastlín pre obe série experimentov.[ ...]
Vo všetkých týchto experimentoch však boli do analýzy zahrnuté priemerné vzorky rastlín, ako sa to robí pri bežnom určovaní množstva fosforu prijatého rastlinami z hnojív. Jediný rozdiel bol v tom, že množstvo fosforu odoberaného rastlinami z hnojiva nebolo určené rozdielom medzi obsahom fosforu v kontrolnej a pokusnej rastline, ale priamym meraním množstva označeného fosforu, ktorý sa dostal do rastliny z hnojiva. . Paralelné chemické analýzy rastlín na obsah fosforu v týchto experimentoch umožnili určiť, aký podiel z celkového obsahu fosforu v rastline tvoril fosfor hnojiva (označený) a fosfor odoberaný z pôdy (neoznačený).
Hrubá analýza sa vykonáva buď na listoch určitej polohy na rastline, alebo v celej nadzemnej časti, alebo v iných indikačných orgánoch.
Diagnostika podľa hrubá analýza listy - zrelý, ukončený rast, ale aktívne fungujúci, sa nazýval "diagnostika listov". Navrhli ho francúzski vedci Lagatu a Mom a podporil ho Lundegard. V súčasnosti je tento typ chemickej diagnostiky široko používaný v zahraničí aj u nás, najmä u rastlín, v ktorých koreňoch sú dusičnany takmer úplne redukované, a preto nie je možné touto formou kontrolovať výživu dusíkom v nadzemných častiach (jablko a iné semenné a kôstkové ovocie). , ihličnaté, bohaté na triesloviny, cibuľovité atď.).
Pri hromadnej analýze listov alebo iných častí rastlín sa na stanovenie N, P, K, Ca, Mg, S a ďalších prvkov v nich používajú obvyklé metódy spopolňovania organickej hmoty. Častejšie sa stanovenie uskutočňuje v dvoch častiach: v jednej sa dusík stanovuje Kjeldahlom, v druhej zostávajúce prvky po mokrom, polosuchom alebo suchom spopolnení. Pri mokrom spopolňovaní sa používa buď silná H2SO4 s katalyzátormi, alebo zmiešaná s HNO3, alebo s HClO4, alebo s H2O2. Pri suchom popole je potrebná starostlivá kontrola teploty, pretože pri spaľovaní pri teplotách nad 500 °C môže dochádzať k stratám P, S a iných prvkov.
Z iniciatívy Francúzska bol v roku 1959 zorganizovaný Medziinštitucionálny výbor pre štúdium techniky diagnostiky chemických listov, ktorý pozostával z 13 francúzskych, 5 belgických, 1 holandského, 2 španielskych, 1 talianskeho a 1 portugalského inštitútu. V 25 laboratóriách týchto ústavov boli vykonané chemické rozbory rovnakých vzoriek listov 13 plodín (poľných a záhradných) na celkový obsah N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu a Zn. To umožnilo výboru po matematickom spracovaní údajov odporučiť metódy na získanie štandardných vzoriek listov a poskytnúť štandardné metódy ich chemickej analýzy na kontrolu presnosti takýchto analýz v diagnostike listov.
Popolenie vzoriek listov sa odporúča nasledovne: na stanovenie celkového dusíka podľa Kjeldahla popol s H2SO4 (šp. hmotnosť 1,84), s katalyzátormi K2SO4 + CuSO4 a selén. Na stanovenie ďalších prvkov sa používa suché spopolnenie vzorky v platinových miskách s postupným (2 hodinovým) ohrevom mufle na 450 °C; po 2 hodinách ochladzovania v mufle sa popol rozpustí v 2-3 ml vody + 1 ml HCl (hmotnosť 1,19). Odparujte na sporáku, kým sa neobjavia prvé výpary. Pridajte vodu, prefiltrujte do 100 ml odmernej banky. Filtračný koláč sa spopolní pri 550 °C (maximálne), pridá sa 5 ml kyseliny fluorovodíkovej. Vysušte na dlaždici pri teplote neprevyšujúcej 250 °C. Po ochladení sa pridá 1 ml tej istej HCl a znova sa prefiltruje do tej istej banky, premyje sa teplá voda. Filtrát doplnený vodou na 100 ml sa používa na analýzu obsahu makro- a mikroprvkov.
Existuje pomerne veľká variácia v spôsoboch spopolňovania vzoriek rastlín, ktoré sa líšia najmä v rastlinných druhoch – bohatých na tuky alebo kremík a pod., a v úlohách určovania určitých prvkov. Dosť Detailný popis Techniku použitia týchto metód suchého spopolňovania dostal poľský vedec Novosilsky. Poskytujú aj popisy rôznymi spôsobmi mokré spopolnenie pomocou určitých oxidačných činidiel: H2SO4, HClO4, HNO3 alebo H2O2 v jednej alebo druhej kombinácii, v závislosti od stanovovaných prvkov.
Pre urýchlenie rozboru, nie však na úkor presnosti, sa hľadajú spôsoby takého spôsobu spálenia rastlinnej vzorky, ktorý by umožnil určiť viacero prvkov v jednej vzorke. V. V. Pinevich použil spopolnenie H2SO4 na stanovenie N a P v jednej vzorke a následne pridal 30 % H2O2 (skontroloval, či neobsahuje P). Tento princíp spopolňovania s určitými vylepšeniami našiel široké uplatnenie v mnohých laboratóriách v Rusku.
Ďalší široko používaný spôsob kyslého spopolňovania vzorky na súčasné stanovenie viacerých prvkov v nej navrhol K.E. Ginzburg, G.M. Shcheglova a E.A. Wolfius a je založený na použití zmesi H2SO4 (sp. hmotnosť 1,84) a HClO4 (60%) v pomere 10:1, pričom zmes kyselín je predbežne pripravená pre celú dávku analyzovaného materiálu.
Ak je potrebné stanoviť síru v rastlinách, opísané metódy spopolňovania nie sú vhodné, pretože zahŕňajú kyselinu sírovú.
P.X. Aydinyan a jeho spolupracovníci navrhli spáliť vzorku rastliny, aby sa v nej stanovila síra, zmiešaná s bartolitovou soľou a čistým pieskom. Metóda V. I. Kuznecova s jeho spolupracovníkmi je trochu prepracovanou Schönigerovou metódou. Princíp metódy spočíva v rýchlom spopolnení vzorky v banke naplnenej kyslíkom s následnou titráciou vzniknutých síranov roztokom chloridu bárnatého s kovovým indikátorom bárnatej nitchromázy. Na zabezpečenie väčšej presnosti a reprodukovateľnosti výsledkov analýzy odporúčame nechať výsledný roztok prejsť kolónou s iónomeničovou živicou v H+ forme, aby sa roztok uvoľnil od katiónov. Takto získaný síranový roztok by sa mal odpariť na platni na objem 7-10 ml a po ochladení titrovať.
Novosilsky, poukazujúc na veľké straty síry pri suchom spopolňovaní, uvádza pre tieto analýzy recepty na popolovacie zariadenia. Autor považuje za jeden z najjednoduchších a najrýchlejších spôsobov spopolňovania podľa Buttersa a Cheneryho kyselinou dusičnou.
Stanovenie obsahu každého prvku vo vzorke popola tak či onak sa vykonáva rôznymi metódami: kolorimetrická, komplexometrická, spektrofotometrická, neutrónová aktivácia, pomocou autoanalyzátorov atď.